胰蛋白酶大致可以分為兩種，一種是傳統(tǒng)使用的動(dòng)物源性的胰蛋白酶，主要提取自牛或豬的胰腺組織，其缺點(diǎn)是可能會(huì)帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)；另一種則是非動(dòng)物源性胰酶，即利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。
胰蛋白酶 ：早期的胰蛋白酶在生物制藥的主要應(yīng)用是胰島素的生產(chǎn)，不過(guò)很快也在其他領(lǐng)域發(fā)光發(fā)熱。動(dòng)物源的胰蛋白酶具有極大的潛在風(fēng)險(xiǎn)，其自身可能攜帶大量可感染人的病毒， 例如：瘋牛病的牛帶有的BSE病毒，豬的口蹄疫病毒，可在人和動(dòng)物之間傳播的禽類(lèi)的流感病毒等。
重組胰蛋白酶 ：重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶。在整個(gè)生產(chǎn)流程中，嚴(yán)格避免了使用任何動(dòng)物源性原材料，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，確保了重組胰蛋白酶產(chǎn)品的安全性、高純度及超高比活等特性。是生物藥及科研領(lǐng)域不可缺少的工具酶。
重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶
冀百康生物全新推出的重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶，是通過(guò)畢赤酵母的表達(dá)系統(tǒng)，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)、分離純化，再經(jīng)冷凍干燥得到的重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶粉末。不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。與重組豬胰蛋白酶等不同，該重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶不易自切，配制為細(xì)胞消化液后可在2-8℃穩(wěn)定存放30天，可完美規(guī)避在使用重組胰蛋白酶過(guò)程中反復(fù)凍融而造成的損耗。TrypRE select(1×)（重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶消化液）更是可在2-8℃條件下可保存24個(gè)月。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
1、不易自切，穩(wěn)定性較高；
2、避免反復(fù)凍融造成的損耗；
3、對(duì)細(xì)胞作用溫和：細(xì)胞毒性小，可保持細(xì)胞健康；
4、合規(guī)性：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，符合GMP指導(dǎo)原則。
科普 —— “不易自切”
不易自切是指重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶在催化蛋白質(zhì)水解反應(yīng)過(guò)程中，相較于傳統(tǒng)胰蛋白酶，不容易發(fā)生自我水解作用，從而避免了自身蛋白分子的快速降解。這種特性使得重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶在保持酶活力和穩(wěn)定性方面具有顯著優(yōu)勢(shì)，尤其是在長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存和反復(fù)凍融過(guò)程中，能夠最大程度地減少酶活性的損失。
與常見(jiàn)酶液對(duì)比
重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶的高比活性能顯著提高細(xì)胞消化的效率。使用重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行處理，能夠快速水解細(xì)胞間的沾粘蛋白，釋放出單個(gè)獨(dú)立細(xì)胞。與此同時(shí)，重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶不易自切的特性，使得其在細(xì)胞消化過(guò)程中能更溫和地作用，降低對(duì)細(xì)胞造成的傷害，有效避免外源性病毒和內(nèi)毒素的污染，從而不會(huì)影響細(xì)胞傳代，保持了高細(xì)胞活力和細(xì)胞產(chǎn)量。
*細(xì)胞傳代示意圖
（來(lái)源：醫(yī)健速知《細(xì)胞傳代詳細(xì)步驟》）
推薦在實(shí)際應(yīng)用中的使用步驟：
1）使用前將TrypRE select(1×)和完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基預(yù)熱至37℃。隨后，吸出并丟棄用過(guò)的培養(yǎng)基；
2）用5ml不含Ca2+和Mg2+的DPBS緩沖液清洗細(xì)胞，隨后吸出并丟棄；
3）加入適量體積TrypRE select(1×)到培養(yǎng)瓶，確保TrypRE select(1×)完全覆蓋細(xì)胞；
4）在37℃下孵育，直至細(xì)胞脫落。使用倒置顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞，以確保細(xì)胞從培養(yǎng)瓶表面完全脫落；
5）加入5-10ml預(yù)熱的完全培養(yǎng)基到培養(yǎng)瓶，傾斜培養(yǎng)瓶直到徹底沖洗培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml錐形管中，100×g離心5-10min；
6）丟棄上清液，并用2-5ml預(yù)熱的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀；
7）根據(jù)您的細(xì)胞類(lèi)型，根據(jù)正常方案接種、孵育和繼代培養(yǎng)。
重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶有許多潛在用途，包括用于生物藥物生產(chǎn)，如胰島素等。重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)是生物藥及科研領(lǐng)域是不可缺少的工具酶。
產(chǎn)品參數(shù)
訂購(gòu)規(guī)格
珠海冀百康生物科技有限公司成立于2015年，擁有前沿的合成生物學(xué)創(chuàng)新技術(shù)，專(zhuān)注于“高活性生物原料”與“高端生物制藥”兩大核心領(lǐng)域。產(chǎn)品主要應(yīng)用在抗體、疫苗、蛋白類(lèi)、核酸類(lèi)藥物的生產(chǎn)以及細(xì)胞培養(yǎng)、人造肉、功效護(hù)膚和醫(yī)美領(lǐng)域。冀百康生物擁有4000多㎡符合國(guó)際GMP標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)車(chē)間， 超2噸的生物發(fā)酵罐；行業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)力主要體現(xiàn)在：研發(fā)創(chuàng)新能力強(qiáng)，客戶(hù)服務(wù)系統(tǒng)完善，給品牌客戶(hù)提供完整的解決方案及CDMO/ODM服務(wù)。
參考文獻(xiàn)：
1、知網(wǎng) [1]楊霽菡.胰蛋白酶自切規(guī)律的解析及抗自切改造[D].天津科技大學(xué),2016.DOI:10.27359/d.cnki.gtqgu.2016.000036
2、來(lái)源：冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)藥學(xué)(英文版), 2014, 23(5): 335-337.
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